激光共聚焦顯微鏡OLS5100技術(shù)簡(jiǎn)述

1. 點(diǎn)照明：激光束通過照明針孔，被物鏡聚焦到樣品表面一個(gè)極小的點(diǎn)上。

   
   

2. 點(diǎn)探測(cè)：從樣品該點(diǎn)反射（或激發(fā)出的熒光）的光信號(hào)，再次被物鏡收集，并穿過一個(gè)被稱為“共聚焦針孔"的小孔，最終被探測(cè)器（如光電倍增管PMT）接收。

   
   

3. 空間濾波：這個(gè)共聚焦針孔是關(guān)鍵。只有從樣品焦平面上的點(diǎn)發(fā)出的光，才能恰好聚焦通過針孔被高效探測(cè)。而從焦平面上下方（非焦點(diǎn)區(qū)域）發(fā)出的雜散光，則會(huì)被針孔阻擋，無(wú)法到達(dá)探測(cè)器。

   
   

4. 二維成像：通過掃描裝置（通常為振鏡）使激光焦點(diǎn)在樣品表面進(jìn)行X-Y方向逐點(diǎn)或逐線掃描，同步記錄每個(gè)點(diǎn)對(duì)應(yīng)的光強(qiáng)信號(hào)，即可在計(jì)算機(jī)上重建出一幅二維的共聚焦圖像。這幅圖像主要反映了樣品焦平面一個(gè)薄層的信息，具有較好的對(duì)比度和軸向分辨率。

   
   

• 激光光源：提供高強(qiáng)度、單色性好的點(diǎn)光源。常用固態(tài)激光器，波長(zhǎng)例如405nm, 473nm, 532nm, 635nm等，不同波長(zhǎng)適用于不同樣品材料或熒光染料。

  
  

• 掃描單元：通常采用高速振鏡控制激光束在樣品上的掃描路徑。

  
  

• 共聚焦針孔：一個(gè)可調(diào)節(jié)直徑的小孔，用于空間濾波，其大小影響光學(xué)切片厚度和圖像信噪比。

  
  

• 探測(cè)器：接收通過針孔的光信號(hào)并轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，如光電倍增管（PMT），具有高靈敏度和快速響應(yīng)特性。

  
  

• 高精度Z軸驅(qū)動(dòng)：用于實(shí)現(xiàn)焦平面的精確步進(jìn)移動(dòng)，以獲取Z軸序列圖像。

  
  

• 物鏡：高質(zhì)量物鏡負(fù)責(zé)將激光聚焦到樣品，并收集返回的光信號(hào)。其數(shù)值孔徑（NA）直接影響系統(tǒng)分辨率。

  
  

• 控制與圖像處理計(jì)算機(jī)及軟件：控制整個(gè)硬件協(xié)同工作，采集圖像數(shù)據(jù)，并進(jìn)行三維重建、顯示、測(cè)量和分析。

  
  

通過這些技術(shù)的結(jié)合，激光共聚焦顯微鏡OLS5100能夠?qū)崿F(xiàn)比傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡更清晰的“光學(xué)切片"成像，并能獲取樣品表面的三維形貌數(shù)據(jù)，為后續(xù)的定量分析奠定基礎(chǔ)。其技術(shù)路徑旨在平衡成像質(zhì)量、測(cè)量能力和操作效率。

激光共聚焦顯微鏡OLS5100技術(shù)簡(jiǎn)述